Dismiss Notice
THÔNG BÁO: Phiên bản tháng Giêng 2018 cho Đũa Thần Điện Toán với nhiều thay đổi lớn đã được phát hành. ĐẶC BIỆT: Đũa Thần Điện Toán 64 Gig Duo phiên bản 2018 sẽ tự động cập nhật hóa, không cần phải gửi về Thư Viện Việt Nam Toàn Cầu!

Tác dụng chữa bệnh của rượu tỏi ít ai biết đến

Chủ đề trong 'Biên Khảo' do Mộng Tiên khởi đầu 20 tháng Mười 2017.

  1. Mộng Tiên

    Mộng Tiên Người quen Tình Nguyện Viên

    Cách ngâm rượu tỏi cực kỳ đơn giản, mà gia đình nào cũng nên làm bởi tác dụng của rượu tỏi rất tốt cho sức khỏe và có hiệu quả chữa bệnh cao.
    Từ bao đời nay, tỏi không chỉ là gia vị thiết yếu trong mỗi căn bếp, mà còn được biết đến là bài thuốc chữa bệnh hiệu quả.

    Theo phân tích của các nhà nghiên cứu, trong tỏi có chứa 3 hợp chất rất tốt cho sức khỏe là Allicin, Liallyl sunfid, Ajoen, trong đó Allicin là hoạt chất kháng sinh tự nhiên rất mạnh có tác dụng kháng khuẩn, virus, ký sinh trùng gây bệnh. Ngoài ra, tỏi còn có rất nhiều vitamin, chất khoáng như Canxi, Selen,... tốt cho sức khỏe.

    Đặc biệt, khi tỏi ngâm rượu, rượu tỏi có tác dụng tăng cường sức đề kháng cơ thể và chữa bệnh hiệu quả.

    Theo các nghiên cứu phân tích của Tổ Chức Y Tế Thế Giới, rượu tỏi chữa được những bệnh như sau:

    Bệnh tim mạch: Rượu tỏi chứa những chất chống ôxy hóa cực mạnh có tác dụng làm giảm mỡ máu ngăn chặn cao huyết áp, đau thắt ngực, nhồi máu cơ tim, đột quỵ.

    Bệnh hô hấp: Hoạt chất Allicin trong rượu tỏi có tác dụng tiêu diệt các vi khuẩn gây bệnh viêm họng, viêm phế quản, hen phế quản...

    Bệnh về xương khớp: Theo kết quả nghiên cứu của các nhà khoa học Mỹ, rượu tỏi làm hạn chế việc sinh ra các phần tử tự do gây tổn thương đến xương khớp.

    Bệnh tiêu hóa: Allicin chứa trong rượu tỏi có công dụng trị các chứng bệnh đầy hơi, ợ chua, khó tiêu, dạ dày...

    Bệnh tim mạch: Rượu tỏi chứa những chất chống ôxy hóa cực mạnh có tác dụng làm giảm mỡ máu ngăn chặn cao huyết áp, đau thắt ngực, nhồi máu cơ tim, đột quỵ.

    Bệnh hô hấp: Hoạt chất Allicin trong rượu tỏi có tác dụng tiêu diệt các vi khuẩn gây bệnh viêm họng, viêm phế quản, hen phế quản...

    Bệnh về xương khớp: Theo kết quả nghiên cứu của các nhà khoa học Mỹ, rượu tỏi làm hạn chế việc sinh ra các phần tử tự do gây tổn thương đến xương khớp.

    Bệnh tiêu hóa: Allicin chứa trong rượu tỏi có công dụng trị các chứng bệnh đầy hơi, ợ chua, khó tiêu, dạ dày...

    upload_2017-11-20_15-2-58.jpeg

    Cách ngâm rượu tỏi phải chính xác và sử dụng đúng liều lượng mới phát huy được tác dụng chữa bệnh.

    Rượu tỏi là bài thuốc quý có hiệu quả chữa bệnh tốt, không gây phản ứng phụ nên đang được rất nhiều người sử dụng. Tuy nhiên cách ngâm rượu tỏi thế nào không phải ai cũng biết.

    Theo hướng dẫn của Tổ Chức Y Tế Thế Giới WHO, để rượu tỏi phát huy tác dụng tốt nhất cần phải ngâm đúng cách và sử dụng đúng liều lượng.

    Có thể dùng tỏi Lý Sơn, tỏi cô đơn (tỏi một nhánh), tỏi đen hoặc tỏi thông thương để ngâm rượu.

    Cách ngâm rượu tỏi đúng cách: Lấy 40g tỏi khô bóc vỏ (lưu ý không dùng tỏi tươi) cắt mỏng hoặc đập dập cho vào chai ngâm với 100ml rượu quê hoặc rượu nếp (40-45 độ) đậy kín để nơi khô thoáng. Sau 2-3 ngày lấy chai ra lắc đều để tỏi ngấm đều rượu. Đến ngày thứ 10 sau khi rượu chuyển từ màu trắng sang màu vàng nghệ thì mang ra sử dụng.

    Ngày uống 2 lần, mỗi lần 1 thìa cà phê vào lúc trước khi ăn sáng và trước khi đi ngủ. Uống trong khoảng 20 ngày thì hết nên cứ 10 ngày lại ngâm tiếp để có thể uống liên tục.

    Lưu ý: Tỏi có tính nóng nên khi dùng rượu tỏi trong thời gian dài cần phải linh động thay đổi lượng rượu để đáp ứng điều kiện cơ thế mỗi người
    P.V (tổng hợp)
     
  2. LuongYViet

    LuongYViet Công Dân

    Kính chào Khách Quý MỘNG TIÊN,
    Cầu chúc Bạn Ngày An Vui.
    Tôi xin phép được tự giới thiệu: Là Lương Y; có Giấy Phép Hành Nghề.
    Rất mong Bạn giúp cho... Số hay đường dẫn, trang Website - của các: Báo cáo Khoa Học của Y Tế Thế Giới - Về các nghiên cứu - rượu Tỏi (của các nhà nghiên cứu).
    Mong chờ Bạn hồi đáp.
    Cảm ơn.
    Và trân trọng.
     
  3. LuongYViet

    LuongYViet Công Dân

    Tình cờ, tôi tìm được trang nầy...
    https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3147487/

    Nghiên cứu tác dụng kháng khuẩn của tỏi và các hợp chất hữu cơ tạo ra tỏi trên Campylobacter jejuni bằng cách sử dụng quang phổ hồng ngoại biến dạng Fourier, quang phổ Raman và kính hiển vi điện tử

    Xiaonan Lu , 1, 4 Barbara A. Rasco , 1, * Jamie MF Jabal , 2 D. Eric Aston , 2 Mengshi Lin , 3 và Michael E. Konkel 4
    Thông tin về tác giả ► Bài viết ghi chú ► Bản quyền và thông tin về giấy phép ►
    Bài viết này đã được trích dẫn bởi các bài báo khác trong PMC.

    Đi đến:
    TRỪU TƯỢNG
    Phổ hồng ngoại biến đổi Fourier (FT-IR) và quang phổ Raman được sử dụng để nghiên cứu tổn thương tế bào và vô hiệu hóa Campylobacter jejuni do tiếp xúc với các chất chống oxy hoá từ tỏi. C. jejuni được xử lý với các nồng độ tỏi khác nhau và các hợp chất hữu cơ lưu huỳnh trong các môi trường nuôi cấy và nước muối ở 4, 22, và 35 ° C. Hoạt tính kháng khuẩn của sulfua diallyl tăng với số lượng các nguyên tử lưu huỳnh (diallyl sulfide <diallyl disulfide <diallyl trisulfide). Phổ Quang FT-IR xác nhận rằng hợp chất hữu cơ sulfur chịu trách nhiệm cho hoạt động kháng khuẩn đáng kể của tỏi, lớn hơn nhiều so với các hợp chất phenolic tỏi, như được biểu hiện bằng sự thay đổi đặc tính quang phổ của protein, lipid và polysaccharides trong màng tế bào vi khuẩn. Kính hiển vi Raman hợp chất (532-nm-chất nền hạt vàng) và bản đồ Raman của một vi khuẩn đơn đã xác nhận sự hấp thu nội bào của các thành phần lưu huỳnh và phenol. Kính hiển vi điện tử quét (SEM) và kính hiển vi điện tử truyền (TEM) được sử dụng để xác định tổn thương tế bào.Phân tích thành phần chính (PCA), phân tích chức năng phân biệt (DFA) và mô hình độc lập mềm của các chất tương tự bậc (SIMCA) đã được thực hiện và kết quả đã được xác nhận chéo để phân biệt vi khuẩn dựa trên mức độ tổn thương tế bào. Phương pháp hồi quy nhỏ nhất (PLSR) được sử dụng để định lượng và dự đoán số tế bào vi khuẩn lành mạnh và tổn thương thực tế còn lại sau khi điều trị. Các lô nạp dựa trên PLSR đã được điều tra để xác minh thêm những thay đổi trong màng tế bào của C. jejuni được xử lý với các hợp chất hữu cơ lưu huỳnh. Chúng tôi đã chứng minh rằng tổn thương do vi khuẩn và bất hoạt có thể được điều tra chính xác bằng các quang phổ hồng ngoại và quang phổ Raman bổ sung sử dụng dấu vân tay "toàn bộ cơ thể" dựa trên hóa học với sự trợ giúp của phép đo quang học và kính hiển vi điện tử.

    Đi đến:
    GIỚI THIỆU
    Chiết xuất từ trái cây và rau có thể ức chế sự phát triển của vi sinh vật gây bệnh và vi khuẩn gây hư hỏng trong thực phẩm và đang được đánh giá là chất bảo quản thực phẩm, một phần là do nhu cầu của người tiêu dùng về chất bảo quản thực phẩm ít hơn. Các thực phẩm có hàm lượng phenol cao đã nhận được nghiên cứu lớn nhất, và hiệu quả của chúng như các chất kháng khuẩn được xác nhận ( 1 , 2 , 7 , 11 ). Ví dụ, chất chiết xuất từ nam việt quạn ức chế sự phát triển của mầm bệnh khác nhau ( 25 , 55 , 56 , 57 ). Tác dụng chống vi khuẩn của tỏi chủ yếu là do các hợp chất hữu cơ lưu huỳnh ( 19 , 23 , 24 , 45 , 47 , 49 , 52 ), như allicin ( 5 , 10 , 14 , 32 ), ajoene ( 38 ) và diallyl sulfide , 48 , 59 ). Tuy nhiên, những người khác đã chứng minh rằng sự đóng góp của tính chất chống vi khuẩn cũng từ các hợp chất phenolic ( 6 , 21 , 31 ).

    Phổ quang rung động (cả hồng ngoại [IR] và quang phổ Raman) được sử dụng rộng rãi để mô tả các hệ thống sinh học phức tạp dựa trên các thành phần hóa học của chất phân tích ( 36 , 37 , 39 ). Khi kết hợp quang phổ hồng ngoại và Raman, một dấu vân tay đặc biệt, rộng được tạo ra qua vùng sóng số (từ 1.800 đến 400 cm -1 cho cả phổ IR và Raman) để xác định và phân biệt các chất phân tích như vi khuẩn ( 20 , 50). Lợi ích chính của việc sử dụng phổ học rung động để nghiên cứu vi khuẩn là tốc độ phát hiện cao, vận hành phản ứng, nhận dạng tương đối chính xác các thành phần liên quan, và khả năng phân biệt mẫu vật sinh học, kể cả vi khuẩn, với các loài và mức độ ( 42 , 54 ). Vi khuẩn có thể được xác định trong vòng 6 giờ bằng quang phổ Raman và 8 giờ bằng quang phổ hồng ngoại ( 9 , 22 , 29 ). Gần đây, các phương pháp quang phổ này đã được áp dụng rộng rãi để nghiên cứu tổn thương vi khuẩn và bất hoạt bằng các phương pháp điều trị khác nhau như bacteriocin ( 8 ), kháng sinh ( 28 , 33 , 40 ), nhiệt ( 3 , 4 ) và sonication ( 27 ).Phổ hồng ngoại hữu ích cho việc phát hiện vi khuẩn số lượng lớn (giới hạn phát hiện là ~ 10 4 đến 10 5CFU / ml) ( 12 ), trong khi quang phổ Raman có khả năng phát hiện các tế bào vi khuẩn đơn lẻ ( 46 ), đặc biệt khi sử dụng một chất nano được sử dụng để tăng cường tín hiệu, một kỹ thuật được gọi là quang phổ Raman tăng cường bề mặt (SERS) ( 13 ).

    Trong nghiên cứu hiện tại, sự tổn thương của Campylobacter jejuni đã được điều tra. Chất gây bệnh trên thực phẩm này đã bị phơi nhiễm với các thành phần thực phẩm, đặc biệt là tỏi và dầu cọ. C. jejuni có thể tồn tại bên ngoài vật chủ trong một thời gian dài, và hiện nay nó được xem là nguyên nhân phổ biến nhất của bệnh tật do vi khuẩn gây ra trên thực tế trên thế giới ( 43 ). Những người bị nhiễm C. jejuni bị chứng chuột rút, sốt, tiêu chảy kèm theo máu và bạch cầu. Các nghiên cứu trước đây đã kiểm tra tính hiệu quả của chiết xuất trái cây ( 53 ), tinh dầu thực vật và chiết xuất ( 15 , 26 ), và các hợp chất phenolic ( 16 , 17 ) để kiểm soát sự phát triển của C. jejuni . Tuy nhiên, không có báo cáo nghiên cứu liên quan đến loài Allium , chẳng hạn như tỏi.

    Theo sự hiểu biết tốt nhất của chúng tôi, đây là bài báo đầu tiên kết hợp phổ hồng ngoại và quang phổ Raman để nghiên cứu stress và tổn thương do vi khuẩn. Phát hiện nhanh và định lượng các tế bào vi khuẩn bị tổn thương sublethally rất quan trọng đối với an toàn thực phẩm vì các vi sinh vật có thể tự sửa chữa nếu điều kiện thuận lợi và sau đó bắt đầu phát triển trong các sản phẩm thực phẩm, có tiềm năng gây bệnh ( 58). Hai kỹ thuật phổ học rung động cung cấp thông tin sinh hóa bổ sung về thành phần tế bào vi khuẩn cho một cách tiếp cận hoàn chỉnh hơn để phân tích phản ứng tế bào vi khuẩn trong môi trường căng thẳng. Mục tiêu của nghiên cứu này là để kết hợp các phương pháp phân tích phổ học với các phép thử hình thái học để hiểu rõ hơn về cơ chế tổn thương do vi khuẩn do tiếp xúc với các hợp chất hữu cơ lưu huỳnh.

    Đi đến:
    VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP


    Hóa chất và thuốc thử.
    Chất phản ứng Folin-Ciocalteu, 2,2 diphyenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH), axit 6-hydroxy-2,5,7,8-tetrametyl-2-carboxylic (trolox), axit gallic, acetonitril, methanol, và tetrahydrofuran từ Sigma-Aldrich (St. Louis, MO). Natri cacbonat được mua từ JT Baker, Inc. (Phillipsburg, NJ). Tất cả các hóa chất được sử dụng là sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC). Diallyl sulfide (độ tinh khiết, 98%) và disulfide thô diallyl (độ tinh khiết, 80%) được mua từ Sigma-Aldrich Chemical Co. (Milwaukee, WI).Dishl disulfide được tinh chế thêm bằng cách chưng cất phân đoạn đến độ tinh khiết cuối cùng lớn hơn 98% được xác định bằng phương pháp HPLC ( 59 ). Trisulfide Diallyl (độ tinh khiết, 97%) được mua từ Fisher Scientific (Pittsburgh, PA).

    Phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng hiệu năng cao với máy dò diod (Agilent 1100 HPLC, Palo Alto, CA) đặt ở 240 nm đã được sử dụng để kiểm tra độ tinh khiết và tính ổn định của thành phần diallyl được sử dụng cho nghiên cứu này. Các hợp chất này được phân tích bằng cột Nova-Pak C 18 (4 μm, 4,6 x 150 mm, Waters Corporation, Milford, MA) và với cột bảo vệ C 18 (5 μm, 3,9 x 20 mm, Waters Corporation, Milford, MA ) sử dụng pha động 70: 27: 3 (acetonitrile-nước-tetrahydrofuran [vol / vol / vol]) và tốc độ dòng chảy 1 ml / phút ( 41 ). Thể tích tiêm của mẫu là 10 μl.



    Chuẩn bị văn hoá.
    Bốn chủng C. jejuni (ATCC 33291, ATCC 33560, ATCC 43430 và ATCC 49943) được lấy từ Microbiologics, Inc. (St. Cloud, MN). Mỗi chủng vi khuẩn đã được chủng riêng vào 50 ml nước canh dưỡng bổ sung campylobacter gồm có nước sinh dưỡng campylobacter no. 2 (CM0067; Oxoid, Anh) bổ sung bổ sung tăng trưởng campylobacter (SR0232E, Oxoid, Anh). Sau đó, mẫu thử nuôi cấy C. jejuni được ủ trong bình k an khí ở 42 ° C trong 48 giờ trong các điều kiện vi khí hậu (10% CO 2 , 5% O 2và 85% N 2 ) sử dụng Pack-MicroAero (Mitsubishi Gas Chemical America, Inc New York, NY). Sau 48 giờ ủ ở 42 ° C, 10 ml nước canh với mỗi chủng được chuyển tới các ống ly tâm vô trùng 50 ml. Các tế bào được thu hoạch bằng cách ly tâm ở 5000 rpm (máy ly tâm bàn Fisher AccuSpin 400), trong vòng 15 phút ở 22 ° C. Để loại bỏ bất kỳ ảnh hưởng nào của các thành phần canh tác và các chất chuyển hóa của vi khuẩn, các viên kết quả được gắn lại trong 10 ml dung dịch muối 0,85% (wt / vol) vô trùng và lấy ly tâm lần nữa.Sau khi ly tâm lần thứ hai, viên nén được lơ lửng trong nước đệm đệm peptone 2% (wt / vol) (Difco), tạo thành các huyền dịch nuôi cấy. Các thể tích bằng nhau của các huyền phù chứa một trong bốn chủng được kết hợp, tạo thành một loại cocktail.



    Phương tiện truyền thông.
    Số lượng khuẩn lạc đã được thực hiện trong bản sao bằng cách mạ trên Preston campylobacter nonselective trung bình. Preston campylobacter không được chọn lọc agar đã được chuẩn bị theo hướng dẫn của nhà sản xuất và bao gồm cơ sở campylobacter agar (CM0689, Oxoid, England), bổ sung tăng trưởng campylobacter (SR0232E, Oxoid, Anh) và máu ngựa lysed (Remel, Lenexa, KS). Các đĩa agar không chọn lọc được ủ ở 42 ° C trong 48 giờ trong điều kiện vi lượng (10% CO 2 , 5% O 2 , và 85% N 2 ).



    Tác dụng kháng khuẩn của tỏi tập trung và các hợp chất hữu cơ sulfur tỏi trên C. jejuni .
    Tỏi tươi thu được từ Global Farms Enterprises, Inc. (Los Angeles, CA), được bảo quản ở nhiệt độ phòng (khoảng 22 ° C) và được sử dụng trong vòng 2 tuần. Các cây đinh hương bóc vỏ đã được đưa vào máy chiết nước ép (Waring Pro) để tạo ra nước tỏi tươi trong điều kiện vô trùng. Nước tỏi nguyên chất ngay lập tức được đưa vào ống ly tâm khử trùng vô trùng 50 ml và ly tâm ở tốc độ 7.000 vòng / phút (máy ly tâm bàn Fisher accuSpin 400, Pittsburgh, PA) trong 10 phút ở 22 o C. Siêu nơ-lem được thu hồi và lọc qua màng polycarbonate 10,0 μm (K99CP04700, GE Water & Process Technologies, Trevose, PA) và sau đó qua một màng polycarbonate cỡ 1 μm (K10CP04700, GE Water & Process Công nghệ, Trevose, PA), và cuối cùng, thông qua một màng polycarbonate cỡ 0.4 μm (K04CP04700, GE Water & Process Technologies, Trevose, PA) dưới chân không để loại bỏ ô nhiễm vi khuẩn tiềm ẩn, tạo ra tỏi tập trung. Toàn bộ quá trình chế biến tỏi được hoàn thành trong vòng 20 phút. Sau đó, tỏi tập trung được lưu trữ ở 4 ° C và được bảo vệ để tránh tiếp xúc với ánh sáng. Nước tinh khiết được thêm vào nước muối vô trùng 0,85% (wt / vol) và / hoặc nước dùng cho chất dinh dưỡng. 2 trong vòng 30 phút để tránh mất các hợp chất hữu cơ lưu huỳnh.

    Tỏi được cô đặc ở các nồng độ khác nhau (0, 6,25, 12,5, 25, 37,5, 50, 75 và 100 ml / ml) trong 100 ml nước muối được khử trùng 0,85% (wt / vol) để nghiên cứu tác dụng diệt khuẩn của nó với các chất dinh dưỡng hạn chế và trong 100 ml nước dung môi không. 2 để điều tra tác động ức chế hoặc ức chế của tỏi tập trung. Mỗi nồng độ của chiết xuất tỏi được thêm vào nước muối và nước cất và sau đó tiêm 1 ml 7 log CFU / ml cốc café C. jejuni để đạt được nồng độ cấy ban đầu khoảng 5 log CFU / ml. Mỗi lần tiêm đều được trộn đều và sau đó ủ ở 4, 22, và 35 ° C trong 0, 1, 3, 5, 7, 10, và 24 giờ (mẫu nước muối) và 0, 1, và 3 ngày mẫu) microaerobically. Tại mỗi lần lấy mẫu, các mẫu được pha loãng với nước đệm peptone vô trùng 2% (wt / vol) vô trùng, và pha loãng thích hợp đã được xoắn ốc. Sau khi ủ ở 42 ° C trong 48 giờ, số lượng các tế bào sống được xác định.



    Đo tổng hàm lượng phenol và khả năng chống oxy hoá tổng cộng.
    Tổng hàm lượng phenol và khả năng chống oxy hoá hoàn toàn được định lượng bởi vì hai thông số này liên quan đến hoạt tính kháng khuẩn của chiết xuất thực vật ( 25 , 31 , 44 ). Hai gam tỏi băm nhỏ được chiết xuất với 15 ml methanol trong điều kiện khuấy từ trong 2 giờ. Chiết xuất được ly tâm ở 4.000 vòng / phút trong 20 phút, và chất trên được lọc. Thủ tục khai thác được lặp lại ba lần, và các supernatants đã được gộp lại với nhau. Trọng lượng của chất khô của chiết xuất được xác định để chuẩn hóa nồng độ ở mức 1 mg / ml.

    Tổng hàm lượng phenol của mỗi chiết xuất được xác định bằng bản sao của quy trình Folin-Ciocalteu theo phương pháp của Sun và các cộng sự ( 51 ), với những thay đổi nhỏ. Nói tóm lại, chất thử Folin-Ciocalteu đã được pha loãng gấp 10 lần với nước deionized. Chiết xuất tỏi (0,1 ml) được trộn với 0,75 ml dung dịch Folin-Ciocalteu đã pha loãng và ủ trong 10 phút ở nhiệt độ phòng (khoảng 22 ° C). Sau đó, thêm 0,75 ml dung dịch natri cacbonat 2% (wt / obj). Hỗn hợp được cho phép đứng trong bóng tối (khoảng 22 ° C) trong 45 phút trước khi độ hấp thụ ở 765 nm được đo bằng một quang phổ kế Ultrospec 4000 UV / ánh sáng nhìn thấy được (Pharmacia Biotech, Cambridge, Anh Quốc) nước deion hoá thay vì chiết xuất mẫu. Tổng giá trị hàm lượng phenol được xác định từ một đường chuẩn được chuẩn bị với một loạt các chất tương đương của gallic acid (GAE), đo bằng miligam trên một gram (trọng lượng khô).

    Năng lực chống oxy hoá của chiết xuất tỏi được đo bằng một phương pháp được Sun và các cộng sự mô tả.( 51 ) sử dụng gốc tự do 2,2 diphyenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH), với những sửa đổi nhỏ. Chiết xuất tỏi (0,1 ml) được thêm vào 1 ml dung dịch DPPH, và sự hấp thụ của dung dịch DPPH được xác định ở 515 nm sau 30 phút ủ ở nhiệt độ phòng (khoảng 22 ° C). Các dung dịch methanol của Trolox được sử dụng để hiệu chuẩn để so sánh năng lực chống oxy hoá của các chất tỏi tập trung. Khả năng chống oxy hoá của mẫu được biểu diễn bằng miligam Trolox equivalent / gram (dry weight) sample.



    Phân tích kính hiển vi điện tử.
    Kính hiển vi điện tử quét (SEM) được thực hiện để kiểm tra sự thay đổi hình thái của tế bào C. jejuni trước và sau khi xử lý với các hợp chất hữu cơ lưu huỳnh (5 μM diallyl sulfide) trong môi trường khử trùng trong 10 giờ ở 22 ° C. Các tế bào C. jejuni điều trị và không được điều trị đã được thu hoạch ở mức 12.000 × g trong 10 phút. Thứ nhất, tế bào C. jejuni được gắn với 2% glutaraldehyde, 2% paraformaldehyde trong dung dịch đệm phosphate 0,1 M. Các mẫu sau đó được rửa bằng nước cất kép và sấy khô bằng phương pháp đông lạnh VirTis (Công ty VirTis, Inc., Gardiner, NY).Các mẫu được gắn lên các cuống SEM và thổi phồng lên bằng một lớp vàng mỏng. Các mẫu màng được quan sát dưới kính hiển vi điện tử quét FEI Quanta 200F (Dụng cụ Phát thải trường, Hillsboro, OR) sử dụng điện áp gia tốc 30 kV.

    Sử dụng kính hiển vi điện tử truyền (TEM) để nghiên cứu hoạt động diệt khuẩn của các hợp chất hữu cơ sulfur có nguồn gốc từ tỏi. Nuôi cấy C. jejuni , chưa được xử lý và được xử lý bằng sulfua diallyl, được đặt vào dung dịch đầu tiên qua đêm ở 4 ° C. Các mẫu được rửa 3 lần với dung dịch đệm phosphate 0,1 M (mỗi lần 10 phút) và đóng sau bằng 2% osmium tetroxide trong 2 giờ ở nhiệt độ phòng. Tiếp theo, các mẫu được rửa nhanh chóng hai lần với bộ đệm 0,1 M (mỗi lần 10 phút), tiếp theo là mất nước bằng các dung dịch ethanol (30%, 50%, 70%, 95% và 100%), sau đó rửa lại hai lần với 100% propylen oxit (mỗi lần 10 phút).Các mẫu vi khuẩn được thấm vào bởi oxit propylen: 1: 1 Nhựa Spurr qua đêm và sau đó 100% nhựa Spurr hai lần (qua đêm mỗi lần). Sau đó, các mẫu được nhúng trong nhựa của Spurr. Các mẫu màu được quan sát thấy trong kính hiển vi điện tử của Philips (Dụng cụ phát thải trường, Hillsboro, OR) hoạt động ở 200 kV.



    Phân tích quang phổ FT-IR.
    Vào cuối mỗi lần điều trị, 100 ml mỗi mẫu được lọc qua một màng lọc nhôm oxit (kích thước lỗ 0,2μm, mật độ quang học 25 mm [OD]) (Anodisc, Whatman, Inc., Clifton, NJ) sử dụng Bộ phận giữ màng lọc chân không Whatman (Danh mục của Whatman 1960-032) để thu hoạch các tế bào vi khuẩn. Bộ lọc màng Anodisc không đóng góp các đặc tính quang phổ giữa các con sóng từ 4.000 đến 1.000 cm -1 và cung cấp một bề mặt mịn và phẳng mà trên đó bộ phim vi khuẩn có thể hình thành. Bộ lọc Anodisc sau đó đã được lấy ra khỏi bộ lọc và sấy khô bằng không khí ở nhiệt độ phòng (khoảng 22 ° C) trong 60 phút.

    Phổ FT-IR được thu thập bằng cách sử dụng một quang phổ Nicolet 380 FT-IR (Thermo Electron, Inc., San Jose, CA). Bộ lọc màng nhôm oxit, được phủ một lớp tế bào vi khuẩn đồng nhất, được tiếp xúc trực tiếp với tế bào tinh thể kim cương (từ 30.000 đến 200cm -1 ) của phản xạ tổng thể suy yếu (ATR). Phổ hồng ngoại được ghi lại từ 4.002 đến 399 cm -1 ở độ phân giải 4 cm -1 . Mỗi quang phổ thu được bằng cách cộng thêm 32 ảnh giao thoa. Sáu phổ được thu được ở nhiệt độ phòng (khoảng 22 ° C) cho mỗi mẫu để có được tổng cộng 18 quang phổ với mỗi lần điều trị. Các thí nghiệm được thực hiện ba lần, và quang phổ từ hai thí nghiệm đầu tiên được sử dụng để thiết lập các mô hình chemometric. Spectra từ thí nghiệm thứ ba được lựa chọn ngẫu nhiên để xác nhận mẫu.



    Phân tích quang phổ Raman.
    Hệ thống quang phổ Wimec alpha 300 Raman (WITec, Ulm, Đức) được trang bị kính hiển vi WITec được sử dụng trong nghiên cứu này. Hệ thống này được trang bị một nguồn laser laze 532 nm và một nguồn laser laze 785 nm. Trong quá trình đo, laser 532 nm tập trung vào mẫu trên kính hiển vi qua một mục tiêu 100 × (Nikon, Melville, NY). Các tín hiệu tán xạ Raman đã được phát hiện bởi thiết bị phát hiện dãy thiết bị ghép kênh tích điện (CCD) với điện tích 1600 x 200 pixel. Kích thước của mỗi điểm ảnh là 16 x 16 μm. Dữ liệu quang phổ được thu thập với phần mềm dự án WITec v2.02 (WITec, Ulm, Đức). Phổ của mỗi mẫu vi khuẩn được thu thập bằng cách sử dụng một mục tiêu 100x với khoảng phát hiện từ 3.700 đến 200cm -1 trong chế độ mở rộng. Đo đạc được thực hiện với thời gian tích hợp 1 giây, với 50 tích lũy quang phổ và khoảng 2 mW điện thế laser. Dữ liệu quang phổ để tạo bản đồ Raman được lấy từ mẫu tại các số sóng nhất định (300 đến 1.800 cm -1 ).

    Klarite (D3 Technologies Ltd, Glasgow, Anh Quốc) Các chất hoạt tính SERS được sử dụng trong nghiên cứu này. Các thiết bị này được chế tạo trên các tấm silicon phủ vàng. Một con chip 6 đến 10 mm 2 , bao gồm một khu vực hoạt động SERS 4-mm với diện tích 4 mm và một khu vực tham chiếu vàng chưa được xử lý, được gắn chặt với một tấm kính trượt tiêu chuẩn. Các tế bào vi khuẩn được điều trị (10 μl) được lắng đọng lên bề mặt, và các phép đo Raman được thực hiện sau 2 giờ sấy trong tủ hút ở nhiệt độ phòng (khoảng 22 ° C).



    Phân tích thống kê và phân tích thống kê.
    Phóng xạ rung động (cả hồng ngoại và Raman) ban đầu được xử lý trước bằng EZ OMNIC 7.1a (Thermo Electron, Inc., Lafayette, CO). Phổ thô đã được trừ khỏi nền tương đối (bộ điều khiển, màng lọc nhôm tráng với dư lượng sau khi lọc). Sau đó, hiệu chỉnh cơ bản tự động đã được sử dụng để làm phẳng đường cơ sở, tiếp theo là làm mịn 5 (Gaussian chức năng của 9.643 cm -1 ). Các quang phổ tiền xử lý đã được đọc bởi Excel (Microsoft, Inc., Redmond, WA). Độ cao và diện tích băng tần được đo và tính toán bởi OMNIC và Origin 8.1 (OriginLab Corp., Northampton, MA). Các phép biến đổi đạo hàm thứ hai sử dụng bộ lọc Savitzky-Golay 9 điểm và các phép biến đổi wavelet (với thang tỷ lệ 7) được thực hiện để xử lý quang phổ trong Matlab để tăng cường độ phân giải các dải được chồng lên và giảm thiểu các vấn đề từ những thay đổi cơ bản không thể tránh khỏi. Khả năng lặp lại của phổ dao động từ ba thí nghiệm độc lập đã được điều tra bằng cách tính D y 1 y 2 theo các phương trình sau:Trong phương trình, y 1 iy 2 i là cường độ tín hiệu của hai quang phổ khác nhau, trong khi ȳ 1 và ȳ 2 là giá trị trung bình của cường độ tín hiệu của hai phổ khác nhau; n đại diện cho các điểm dữ liệu trong vùng số sóng đã chọn. D y 1 y 2 dao động từ 0 đến 2,000. Giá trị càng thấp, thì khả năng tái tạo của quang phổ càng cao, với 0 chỉ ra các dãy phổ giống hệt nhau, 1.000 cho thấy quang phổ hoàn toàn không tương quan, và 2.000 cho thấy quang phổ hoàn toàn không tương quan ( 34 ).

    loại nút Unknown: spanLoại không xác định nút: spanUnknown loại nút: spanUnknown loại nút: spanUnknown loại nút: spanLoại nút Unknown: spanUnknown loại nút: spanLoại không xác định nút: spanUnknown loại nút: spanUnknown loại nút: spanloại nút Unknown: spanloại nút Unknown: spanLoại nút Unknown: spanUnknown loại nút: spanloại nút Unknown: spanLoại nút Unknown: spanUnknown loại nút: spanLoại không xác định nút: spanUnknown loại nút: spanUnknown loại nút: spanloại nút Unknown: spanloại nút Unknown: spanloại nút Unknown: spanloại nút Unknown: spanloại nút Unknown: spanloại nút Unknown: spanLoại không xác định nút: spanUnknown loại nút: spanUnknown loại nút: spanloại nút Unknown: spanloại nút Unknown: spanloại nút Unknown: spanLoại nút Unknown: spanUnknown loại nút: spanLoại không xác định nút: spanUnknown loại nút: spanUnknown loại nút: spanloại nút Unknown: spanloại nút Unknown: spanloại nút Unknown: span--√loại nút Unknown: spanLoại không xác định nút: spanUnknown loại nút: spanUnknown loại nút: spanloại nút Unknown: spanloại nút Unknown: spanloại nút Unknown: spanLoại nút Unknown: spanUnknown loại nút: spanLoại nút Unknown: spanUnknown loại nút: span--√loại nút Unknown: spanloại nút Unknown: spanloại nút Unknown: spanloại nút Unknown: span
    D y 1 y 2 = (1 - r y 1 y 2 ) × 1, 000
    Việc so sánh phổ được thực hiện bằng cách tính độ chọn lọc, cho biết các biến đổi phổ giữa các mẫu tham khảo (kiểm soát tập trung tỏi) và các mẫu được xử lý (vi khuẩn tiêm vào tỏi). Việc nhân tố được thực hiện trên phổ trung bình của các nhóm tương ứng. Phân tích nhân tố chiết xuất dữ liệu quang phổ rung động cao thành các yếu tố hoặc thành phần chính và điểm tương ứng ( 12 ). Các điểm này được sử dụng để tính khoảng cách quang phổ (SD).

    Loại không xác định nút: spanUnknown loại nút: spanUnknown loại nút: spanUnknown loại nút: spanloại nút Unknown: spanLoại nút Unknown: spanUnknown loại nút: spanLoại không xác định nút: spanUnknown loại nút: spanUnknown loại nút: spanLoại nút Unknown: spanUnknown loại nút: spanLoại không xác định nút: spanUnknown loại nút: spanUnknown loại nút: span--√Loại nút Unknown: spanUnknown loại nút: spanloại nút Unknown: span
    Trong đó T i là điểm bán kính cụm của yếu tố thứ i (1, 2 ... i các yếu tố được sử dụng). Độ chọn lọc ( S ) được tính bằng tỷ số giữa khoảng cách quang phổ (SD) giữa phổ trung bình và tổng các giá trị ngưỡng T1T2 (bán kính cụm) như sau: S = SD / ( T 1 + T2 ).

    Các mô hình hóa học được thiết lập dựa trên quang phổ được xử lý, bao gồm phân tích chùm (phân tích thành phần chủ yếu - PCA), phân tích dendrogram (phân tích chức năng phân biệt), phân tích tương tự bậc (mô hình độc lập mềm tương đương bậc [SIMCA]), phân tích, và hồi quy phần tử nhỏ nhất (PLSR). PCA được sử dụng để giảm chiều kích của dữ liệu đa biến trong khi vẫn giữ được hầu hết các sai lệch. Các thành phần chính không liên quan được chọn (PCs) được vẽ và hiển thị dưới dạng cụm ( 18 ). DFA có thể xây dựng các cấu trúc dendrogram nhánh bằng cách sử dụng kiến thức về thành phần của một mẫu sinh học ( 28 ). SIMCA là một phương pháp phân loại có giám sát. Các mẫu thử nghiệm được so sánh với nghiên cứu của họ tương tự như tập huấn luyện các mẫu ( 3 ). Sự kết hợp của các mô hình hóa học khác nhau có thể cải thiện và cuối cùng xác nhận tính chất của các mẫu xét nghiệm (ví dụ, tổn thương C. jejuni ) theo các phương pháp điều trị khác nhau (các hợp chất hữu cơ sulfat tỏi). PLSR đã được sử dụng để phân tích định lượng bằng Matlab. Tổng cộng 18 quang phổ từ mỗi mẫu được sử dụng để thiết lập mô hình hiệu chuẩn. Việc kiểm tra tính hợp lệ để bỏ qua một lần được thực hiện để đánh giá sức mạnh dự đoán của mô hình bằng cách loại bỏ một tiêu chuẩn khỏi bộ dữ liệu tại một thời điểm và áp dụng hiệu chuẩn cho các tiêu chuẩn còn lại. Sự phù hợp của các mô hình phát triển để dự đoán nồng độ của nồng độ C. jejuni đã được đánh giá bằng cách xác định hệ số hồi quy, các biến tiềm ẩn, sai số vuông trung bình của sự ước lượng (RMSEE) và sai số trung bình của sự xác nhận chéo (RMSECV ), được tính bằng các công thức sau ( 12 ).

    Loại không xác định nút: spanUnknown loại nút: spanUnknown loại nút: spanUnknown loại nút: spanUnknown loại nút: spanLoại không xác định nút: spanUnknown loại nút: spanUnknown loại nút: spanUnknown loại nút: spanUnknown loại nút: span---√
    Loại không xác định nút: spanUnknown loại nút: spanUnknown loại nút: spanloại nút Unknown: span√Loại nút Unknown: spanUnknown loại nút: spanLoại không xác định nút: spanUnknown loại nút: spanUnknown loại nút: spanloại nút Unknown: spanLoại nút Unknown: spanUnknown loại nút: spanloại nút Unknown: spanloại nút Unknown: spanLoại nút Unknown: spanUnknown loại nút: spanloại nút Unknown: spanloại nút Unknown: spanloại nút Unknown: spanloại nút Unknown: span
    Trong đó SEE là sai số chuẩn của ước tính, M là tổng số mẫu được phân tích, R là hệ số hồi quy, Y i meas là giá trị nồng độ đo được của mẫu i , và Y i pred là giá trị nồng độ dự đoán của mẫu i . Sự phù hợp tổng thể của các mô hình dự đoán nồng độ C. jejuni được đánh giá từ các giá trị dự báo dư (RPD). RPD là tỷ số của biến thể chuẩn so với sai số chuẩn của dự đoán. Lô tải được lấy từ các phân tích chemometric và được sử dụng để giải thích sự tách biệt hoặc hồi quy tuyến tính của mô hình hóa học dựa trên mức độ phân tử ( 3 ).Các con số sóng từ 1.800 cm -1 đến 900 cm -1 đã được lựa chọn cho các phân tích chemometric dựa trên hồng ngoại, và các con số sóng từ 1.800 cm -1 đến 400 cm -1 được lựa chọn cho các phân tích chemometric dựa trên Raman trong nghiên cứu hiện tại.

    Thử nghiệm được thực hiện trong ba thử nghiệm nhân bản độc lập. Các kết quả được thể hiện như là phương tiện của kết quả của ba bản sao độc lập ± độ lệch tiêu chuẩn. Sự sai khác có ý nghĩa ( P <0,05) giữa dải phổ của phổ và hệ số hồi quy của cốt tải (ba máy tính đầu tiên) được xác định bằng phương pháp phân tích một chiều (ANOVA) theo kiểm định t trong Matlab.

    Đi đến:
    KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN


    Tác dụng ức chế của các hợp chất tỏi và hợp chất lưu huỳnh trên Campylobacter jejuni .
    Hợp chất hữu cơ sulfur và polyphenol có khả năng kháng khuẩn và chống oxy hoá. Tổng hàm lượng phenolic (TPC) của chiết xuất tỏi là 3,57 ± 0,49 mg GAE / g (trọng lượng khô), và tổng dung lượng chống oxy hoá (TAC) được đo bằng DPPH là 0,83 ± 0,12 mg Trolox / g (trọng lượng khô). Độ tinh khiết và tính ổn định của thành phần diallyl được theo dõi trong suốt quá trình nghiên cứu bằng phương pháp HPLC. Cả hai sulfide diallyl và dalil trisulfide được duy trì ở mức 97%, và mức độ disulfide diallyl cao hơn 95%. Tất cả các chất phân tích được sử dụng đều ổn định trong quá trình nghiên cứu, và sự ổn định của các chất phân tích được theo dõi trong quá trình thử nghiệm. Cần lưu ý rằng các hợp chất TAC, TPC và organosulfur ổn định trong một tháng khi giữ trong bóng tối ở 4 ° C và được bảo quản dưới điều kiện để giảm ánh sáng tiếp xúc mà chúng tôi đã thực hiện trong 1 đến 2 tháng. Do đó, các hợp chất hữu cơ sulfur được sử dụng trong vòng 2 tuần, và tỏi tươi đã được chuẩn bị và sử dụng hàng ngày.

    Tác dụng diệt khuẩn của tỏi tập trung vào một loại cocktail của C. jejuni được thể hiện trong Bảng 1 . Hiệu quả diệt khuẩn tăng lên cùng với sự gia tăng nồng độ của tỏi tập trung. Giảm 2- đến 3-log-CFU / ml đã đạt được khi mật ong tỏi cao hơn 25 μl / ml ở 4oC trong 24 giờ. Ở 22 ° C, tác dụng diệt khuẩn lớn hơn hiệu quả của việc xử lý ở 4 ° C, với những ảnh hưởng trong nước muối được phát hiện rõ rệt hơn trong nước dùng chất dinh dưỡng ở nồng độ điều trị vì sự hiện diện của các thành phần đệm. Trong trường hợp điều trị 35oC, các tế bào C. jejuni đã được ngưng hoạt động hoàn toàn ở các nồng độ được kiểm tra sau 24 giờ. Tác dụng ức chế của tỏi tập trung vào một loại cocktail của tế bào C. jejuni được thể hiện trong Bảng 2 . Tác dụng ức chế tăng cùng với sự gia tăng nồng độ tỏi trong nước tiệt trùng. Nhiệt độ điều trị cao hơn (22 và 35 ° C) làm tăng hiệu quả của việc điều trị tỏi thông qua việc tăng cường khuếch tán các thành phần organosulfur vào tế bào và cũng làm tăng hiệu quả của việc điều trị kháng sinh; các thành phần organosulfur được biết là có tác dụng kháng khuẩn lớn hơn đối với các tế bào vi khuẩn trong giai đoạn log.Tác dụng ức chế và diệt khuẩn của các hợp chất hữu cơ sulfur thu được từ tỏi được thể hiện trong các bảng S1 và S2 trong chất bổ sung. Khi số lượng các nguyên tử lưu huỳnh trong các hợp chất hữu cơ lưu huỳnh tăng, hiệu quả kháng khuẩn cũng tăng ở 4, 22 và 35 ° C (diallyl sulfide <diallyl disulfide <diallyl trisulfide). Những phát hiện này phù hợp với những nghiên cứu trước đây ( 41 , 59 ). O'Gara và cộng sự ( 41 ) đã chứng minh rằng các hoạt động kháng khuẩn của sulfua diallyl đối với Helicobacter pylori tăng lên cùng với số lượng các nguyên tử lưu huỳnh. Yin và Cheng ( 59 ) nhận thấy rằng disulfide diallyl hiệu quả hơn trong việc loại trừ các vi sinh vật gây bệnh chính ( Escherichia coli O157: H7 và Listeria monocytogenes ) so với diallyl sulfide trong thịt bò.

    [​IMG]
    Bảng 1.

    Ảnh hưởng của tỏi tập trung vào sự tăng trưởng và tỷ lệ sống của Campylobacter jejuni trong nước muối được khử trùng ở nhiệt độ và thời điểm khác nhau
    [​IMG]
    Ban 2.

    Ảnh hưởng của tỏi tập trung vào sự tăng trưởng và tỷ lệ sống sót của Campylobacter jejuni trong môi trường không được chọn lọc ở campylobacter đã được khử trùng ở nhiệt độ và thời gian khác nhau
    Các thành phần sulfide Diallyl tự nhiên được hình thành trong tỏi, hành tây Trung Quốc và hành tây. Nội dung của sulfua diallyl sulfide và diallyl trong tỏi lần lượt là 250 đến 480 và 2,600 đến 5,100 μg / kg tỏi.Trong nghiên cứu hiện tại, 10 ml tỏi tập trung (18 đến 34 g ốc tươi) có chứa khoảng 10 μM diallyl disulfide. Các nghiên cứu cảm giác trước đây được thực hiện bằng disulfide diallyl, và nồng độ 10% mol của hợp chất hữu cơ sulfur này không tạo ra mùi thơm đặc biệt trong thịt bò, trong khi mùi tỏi mạnh mẽ vẫn giữ được khi sử dụng tỏi từ 18 đến 34 g ( 59 ). Hơn nữa, cần phải chỉ ra rằng các hợp chất organosulfur cung cấp khả năng chống oxy hoá đáng kể, và việc sử dụng các chất này ở những nồng độ này trong các hệ thống thực phẩm khác nhau như là một chất chống oxy hoá và / hoặc chất kháng khuẩn phải là an toàn và chấp nhận được, ít nhất trong mùi vị thơm ngon và vừa phải các loại thực phẩm có nguồn gốc thực vật hoặc thịt có hương vị cao. Hơn nữa, các thành phần sulfua diallyl (sulfua diallyl, sulfua diallyl và trisulfua diallyl) tạo ra khoảng 80% lượng dầu tỏi thương mại, và các hiệu ứng kháng khuẩn đáng kể của các hợp chất hữu cơ sulfur này có thể phần nào giải thích tác dụng kháng khuẩn của dầu tỏi thương mại.



    Các đặc tính quang phổ FT-IR và Raman của Campylobacter jejuni .
    Các đặc tính quang phổ hồng ngoại và Raman của các tế bào còn nguyên vẹn C. jejuni được thể hiện trong hình 1 . Các đặc trưng quang phổ FT-IR của C. jejuni nhưng không có đặc điểm quang phổ Raman của C. jejuni đã được điều tra ( 34 , 35 ). Các tính chất phổ bổ sung (IR và Raman) cung cấp nhiều thông tin hữu ích hơn về các thành phần sinh hóa của màng tế bào vi khuẩn hơn là một mình. Sự phân bố các băng tần thường xuyên tìm thấy trong quang phổ FT-IR và Raman được tóm tắt trong Bảng S3 trong vật liệu bổ sung. Cả quang phổ FT-IR và Raman cung cấp một vùng "dấu vân tay" dưới mức sóng 1,800 cm -1 , phản ánh thông tin chi tiết về thành phần của tế bào C. jejuni . Đối với phổ Raman, các dải ở 646 và 1.614 cm -1 được gán cho tyrosine ( 37 ).Dải ở 726 cm -1 được gán cho C-S của protein, CH 2 rocking, và / hoặc adenine ( 39 ). Dải ở 755 cm -1được gán cho hơi thở đối xứng của tryptophan ( 37 ). Các dải ở 785 và 1,180 cm -1 được gán cho cytosine.Các dải ở 858 và 1,129 cm -1 được chỉ định để kéo dài C-C và liên kết COC 1,4 glycosidic ( 39 ).Các ban nhạc tại 1.004, 1.061 và 1.587 cm -1 được giao cho phenylalanin ( 30 ). Các ban nhạc tại 1.250 và 1.667 cm -1 được giao cho amide III và cấu trúc α-helix của amide I, tương ứng ( 30 ). Ban nhạc tại 1.317 cm -1 được gán cho guanine ( 37 ). Ban nhạc ở 1409 cm -1 được gán cho COO - kéo dài ( 37 ). Ban nhạc tại 1.458 cm -1 được gán cho axit nucleic ( 39 ). Ban nhạc ở 2890 cm -1 được gán cho các CH 2 căng bất đối xứng của lipid và protein ( 30). Ban nhạc đặc biệt tại 2935 cm -1 được gán cho các CH 3 và CH 2 căng ( 30 ). Ban nhạc ở 3059 cm -1 được gán cho (C [​IMG]C-H) (thơm) căng ( 37 ). Đối với phổ FT-IR, các ban nhạc tại 1.080 và 1.236 cm -1 được gán cho căng đối xứng và antisymmetric của P [​IMG]O của axit nucleic, tương ứng ( 37 ). Ban nhạc tại 1.400 cm -1 được gán cho đoạn đối xứng của C-O của COO - nhóm ( 3 ). Ban nhạc tại 1.455 cm -1 được gán cho CH 2uốn của lipid ( 34 ). Các ban nhạc tại 1.545 và 1.647 cm -1 được giao, tương ứng, để amide II và amide I, cấu trúc thứ cấp của protein ( 36 ). Các ban nhạc tại 2.854, 2.929, và 2966 cm -1 có liên quan đến nhóm methylene từ lipid ( 35 ). Ban nhạc đặc biệt tại 3.290 cm -1 được gán cho đoạn N-H của protein và O-H căng của polysaccharides và nước ( 39 ).

    [​IMG]
    Hình 1.

    (a) Raw phổ của một C. jejuni phổ IR truyền (dòng 1, màu xanh lá cây) và micro-Raman (dòng 2, đỏ) với bước sóng kích thích 532 nm. (b) hiển vi các mẫu vi khuẩn. Khung đen chỉ ra khu vực bản đồ đã dành Raman ...
    Vùng vân tay Raman tiết lộ các tính năng bổ sung cho quang phổ FT-IR cho C. jejuni . Những hiện tượng này là kết quả của các cơ chế khác nhau của quang phổ dao động: tán xạ Raman dựa trên những thay đổi trong phân cực của các nhóm chức năng như các nguyên tử rung động, trong khi hấp thụ IR đòi hỏi một sự thay đổi trong giây phút lưỡng cực nội tại xảy ra với rung động phân tử ( 39 ). Do đó, các nhóm cực như C [​IMG]O, N-H và O-H có IR mạnh kéo dài rung động trong quang phổ FT-IR, và nhóm không phân cực như C-C và S-S có ban nhạc Raman mãnh liệt, tất cả trong số đó thêm vào bản chất bổ sung của hai phương pháp, biện minh việc sử dụng cả hai.



    Raman lập bản đồ (đồng nhất) và các nghiên cứu lặp lại quang phổ.
    Các quang phổ hồng ngoại có thể xác định tính duy nhất của vi khuẩn với số lượng lớn do độ rộng tia laser; Tuy nhiên, các máy quang phổ Raman có thể phát hiện tính năng của một tế bào vi khuẩn duy nhất, đặc biệt là với sự trợ giúp của kính hiển vi đồng tiêu. Một ảnh chụp hiển vi của C. jejuni được trình bày trong Hình. 1 b, và khung chỉ ra khu vực bản đồ hình ảnh Raman hiển thị trong bảng điều khiển. Ánh xạ Raman được thực hiện trên một đơn C. jejuni di động trong năm vùng của số sóng khác nhau (713-780 cm -1 , 1.084 đến 1.200 cm -1 , 1,272 đến 1,388 cm -1 , 1518 đến 1,661 cm -1 , và 2788 đến 3033 cm -1 ) với kích thước bước lựa chọn của 3 3 mm 2 (Hình. 1 c), trong đó cung cấp cường độ lớn của ban nhạc nằm rải rác trên các dấu vân tay khu vực Raman (Fig. 1 a). Các địa điểm đậm chỉ ra những đóng góp thấp hơn cường độ ban nhạc, và các vị trí ánh sáng cho thấy sự đóng góp cao hơn cường độ ban nhạc. Do đó, điều quan trọng là phải hiểu rằng trong vi khuẩn đó, cường độ ban nhạc được thay đổi tại các địa điểm khác nhau, và điều này phản ánh sự khác biệt về thành phần tại những địa điểm khác nhau trong tế bào. Nói chung, những tấm bản đồ này rất hữu ích cho việc định lượng thay đổi sinh hóa xảy ra trong các tế bào cá nhân là kết quả của một điều trị thực nghiệm. Ví dụ, sự thay đổi trong các bản phân phối của các axit nucleic (Fig. 1 c, hình ảnh a), protein (Hình. 1 c, hình ảnh b, c), và béo lipid (Hình. 1 c, hình ảnh e) trên màng tế bào có thể được quan sát thấy. Một sự kết hợp của Raman lập bản đồ với phổ Raman cung cấp một phương pháp để bản địa hóa khác biệt về thành phần hóa học trong tế bào, làm cho nó có thể để xác định vị trí cụ thể và loại tổn thương tế bào.

    Năng tái sinh của cả FT-IR và Raman quang phổ từ ba thí nghiệm độc lập được tính toán bằng cách sử dụng hệ số Pearson (biểu thị bằng D y 1 y 2 giá trị). Có nghĩa là D giá trị từ 7 đến 10 được coi là bình thường khi phân tích đạo hàm đầu tiên hoặc thứ hai của mẫu chế biến từ các nền văn hóa phát triển trong các thử nghiệm độc lập, và những người khác đã khẳng định rằng D giá trị có thể cao như 300 khi các vi sinh vật từ chi khác nhau được so sánh ( 34 ) . Các D giá trị phổ FT-IR của C. jejuni có liên quan đến các yếu tố sau: khu vực sóng số (cửa sổ) và tuổi tác văn hóa. Đầu tiên, năm cửa sổ đã được lựa chọn để tính toánD giá trị: (i) khu vực số nguyên sóng, tức là 3.300 đến 900 cm -1 (w 1 ), (ii) 3.000 đến 2.800 cm -1 (axit béo; w 2 ), (iii) 1.800 đến 1.500 cm - 1 (protein và peptide; w 3 ), (iv) 1.500 đến 1.200 cm -1 (vùng hỗn hợp của protein, axit béo, và các hợp chất phosphate mang khác; w 4 ), và (v) 1.200 đến 900 cm -1 ( carbohydrate; w 5 ). Thấp D các giá trị thu được từ w 1 (16,23 ± 0,39-24,13 ± 0,91) và w 5 (19,91 ± 0,45-22,21 ± 1,14), và cao Dgiá trị thu được từ w 2 (56,37 ± 7,31-81,29 ± 10.34), w 3 (39,96 ± 4,59-50,21 ± 10,19), và w 4 (66,46 ± 13,31-75,81 ± 10,29). Đặc hiệu hơn có thể được thu được cho một chủng duy nhất; một ly cocktail bốn-căng được sử dụng trong nghiên cứu này gây ra một cao hơn D giá trị. Thứ hai, thời gian ủ bệnh và ảnh hưởng của nó đối với sự thay đổi quang phổ cũng đã được điều tra và lặp lại quang phổ là phù hợp khi vi khuẩn đã được trồng trong vòng 48 h; Tuy nhiên, như thời gian trồng trọt tăng, D giá trị tăng lên rất nhiều (cao hơn 400 tại 72 h). Mouwen et al. chỉ ra rằng năng tái sinh của quang phổ hồng ngoại của C. jejuni bị ảnh hưởng mạnh bởi tuổi văn hóa (34 ). Đối với C. jejuni , hình dạng của tế bào (hình thức coccoid-xoắn ốc) và sự thay đổi thành phần hóa học là lứa tuổi văn hóa, và cả hai yếu tố có thể ảnh hưởng đáng kể năng tái sinh của các tính năng phổ rung động trong nghiên cứu hiện nay. Các D giá trị cho phổ Raman của C. jejuni được tính toán từ 1.800 đến 400 cm -1 vì tính năng phổ là khác biệt. Các D giá trị là 3,32 ± 0,09-7,93 ± 1,15 sau 48 h trồng trọt, và nó chỉ ra rằng năng tái sinh của quang phổ Raman là lớn hơn so với phổ FT-IR. Sự gia tăng bổ sung trong thời gian ủ bệnh dẫn đến một cao hơn Dgiá trị và độ tái nghèo cho cả Raman và spectroscopies FT-IR, giảm độ tái lập của phương pháp Raman cho một phạm vi tương tự như quan sát cho quang phổ FT-IR. Ví dụ, khi lần trồng đã lớn hơn 48 h, D giá trị tăng đáng kể ( P <0,05), từ 7.93 tại 48 h đến 480 tại 72 h. Phát hiện này nhấn mạnh sự cần thiết phải theo quy trình chuẩn để phân tích quang phổ dao động, chẳng hạn như chuẩn bị trung bình, nhiệt độ tăng trưởng, thời gian ủ bệnh, và kỹ thuật đo quang phổ, nếu lặp lại quang phổ là để có được.



    biến đổi thứ hai phái sinh để làm sáng tỏ chấn thương của vi khuẩn.
    Các biến thể của các tính năng phổ giữa tỏi xử lý (sulfide được điều trị) và biến đổi phi tỏi xử lý (không sulfide xử lý) mẫu vi khuẩn không trực quan phân biệt, và thứ hai phái sinh cần phải được thực hiện để phóng đại sự khác biệt nhỏ trong các tính năng phổ . Các phép biến đổi thứ hai phái sinh có thể giảm lặp lại biến đổi, sự thay đổi cơ bản chính xác, và giải quyết các băng chồng chéo, do đó làm giảm ảnh hưởng của ban nhạc chồng lên nhau ( 3 ). Các giá trị chọn lọc tính theo khoảng tin cậy 95% để phân biệt các chất cô đặc tỏi và hỗn hợp của vi khuẩn và cô đặc tỏi đã được xác định. Chọn lọc các giá trị lớn hơn 1 được coi là quan trọng đối với phát hiện của C. jejuni. Nếu không, các cụm chồng chéo xảy ra (mẫu không khác nhiều so với đối chứng). Với nồng độ cấy ban đầu là 10 5 CFU / ml, giá trị chọn lọc cao hơn 1. Kết quả này là phù hợp với một nghiên cứu trước đó ( 12 ) mà phát hiện ra rằng 10 5 CFU / g là giới hạn phát hiện cho lọc bởi FT- phương pháp IR để xác định các tính năng phổ vi khuẩn.

    Đối với việc chuyển đổi thứ hai bắt nguồn từ phân tích quang phổ FT-IR, việc điều trị bằng cách sử dụng tập trung tỏi (25 ml / Nồng độ ml) hoặc diallyl sulfua (nồng độ 5 mM) ở 4 ° C trong nước mặn tiệt trùng (0,85% [wt / vol ]) được thực hiện để so sánh sự thay đổi quang phổ vi khuẩn. Đối với cả hai phương pháp điều trị tập trung tỏi ( Fig. 2 a) và một điều trị diallyl sulfua ( Fig. 2 b), biến thể phổ được thể hiện trong một số khu vực cùng một ban nhạc cùng với các phương pháp điều trị thời gian (quy mô giờ). Các ban nhạc tại 916 và 991 cm -1 được gán cho một phosphodiester ( 36 ). Ban nhạc tại 1.030 cm -1 được gán cho glycogen và CH 2 OH rung ( 36). Ban nhạc tại 1.055 cm -1 được gán cho một trái phiếu oligosaccharide C-O trong một nhóm hydroxyl có thể tương tác với một số thành phần màng khác, chủ yếu là từ phosphate phospholipid và một phần từ oligosaccharide trái phiếu C-OH ( 36 ). Ban nhạc tại 1.222 cm -1 được gán cho các ban nhạc phosphate trải dài từ nhóm phosphodiester của axit nucleic di động ( 39 ). Ban nhạc tại 1246 cm -1 có liên quan đến PO 2 - (asymmetric) ( 30 ). Ban nhạc tại 1.444 cm -1 được gán cho δCH 2 lipid và axit béo ( 36 ). Ban nhạc tại 1.468 cm -1 được gán cho δCH2 của lipid ( 36 ). Các ban nhạc tại 1.637 và 1.655 cm -1 được giao cho amide I của cấu trúc tấm β-pleated và amide I của cấu trúc α-xoắn ốc, tương ứng ( 30 ).

    [​IMG]
    Hình 2.

    (a) chuyển đổi thứ hai bắt nguồn từ các tính năng phổ FT-IR của C. jejuni điều trị bằng 5 mM diallyl sulfua ở 4 ° C trong khoảng thời gian khác nhau thời gian (đen, 0 h; chàm, 1 h; màu xanh, 3 h; xanh, 5 h; màu đỏ, 24 h). (b) chuyển đổi thứ hai phái sinh ...
    Tuy nhiên, một số khác biệt đã được quan sát giữa tỏi mẫu tập trung xử lý và diallyl sulfua mẫu xử lý khi biến đổi thứ hai phái sinh đã được sử dụng. Ban nhạc tại 1.080 cm -1 được gán cho phosphate đối xứng kéo dài ( 3 ). Ban nhạc tại 1.400 cm -1 được gán cho một đoạn đối xứng của các nhóm methyl trong protein (xương) ( 30 ). Các biến thể trong những một số băng tần có thể là do các hợp chất phenolic trong tập trung tỏi mà có tác dụng kháng khuẩn bổ sung đối với C. jejuni . Phenolics, mà có phần kỵ nước, có thể hoạt động hiệu quả tại giao diện màng nước do vi khuẩn, nhúng vào màng tế bào và do đó làm suy yếu màng tế bào và các quá trình vận chuyển (55 ). Trong nghiên cứu hiện nay, cường độ ban nhạc chỉ có những ban nhạc đã góp phần đáng kể ( P <0,05) với biến đổi thứ hai bắt nguồn từ sự hấp thụ ( y trục của hình. 2 ) được tính toán sử dụng Matlab và xuất xứ. Việc chuyển đổi và cường độ tính toán phổ khẳng định rằng hợp chất có nguồn gốc từ organosulfur tỏi cung cấp sự đóng góp lớn nhất đối với những tác động kháng khuẩn của tinh tỏi, với các hợp chất phenolic có tác động nhỏ hơn.

    Việc chuyển đổi thứ hai dẫn xuất của phổ Raman ( Fig. 3 ) được thực hiện để tiếp tục nghiên cứu sự biến đổi tế bào vi khuẩn dưới sự điều trị của các hợp chất có nguồn gốc từ organosulfur tỏi. Phổ Raman cung cấp thông tin phổ thêm so với phổ FT-IR. Các ban nhạc tại 520-540 cm -1 được giao cho S-S disulfua kéo dài trong protein ( 39 ). Ban nhạc tại 1.004 cm -1 được gán cho phenylalanin ( 39 ). Ban nhạc tại 1.223 cm -1 được gán cho axit nucleic di động ( 37 ). Ban nhạc tại 1454 cm -1 được gán cho CH 2 kéo dài của phospholipid ( 37). Ban nhạc tại 1491 cm -1 được gán cho C-N duỗi rung kết hợp với in-plane C-H uốn trong amin cation triệt để ( 37 ). Ban nhạc tại 1.670 cm -1 được gán cho amide I ( 30 ). Các (có ý nghĩa P<0,05) sự thay đổi trong biến đổi thứ hai bắt nguồn từ các tính năng phổ xung quanh những con số sóng của “lưu huỳnh” rung động khu vực trải dài (520-540 cm -1 ) là một phát hiện rất quan trọng trong nghiên cứu này. Đầu tiên, nó xác nhận những phát hiện từ nghiên cứu trước đây ( 32) Mà hợp chất lưu huỳnh như thiosulfinates chịu trách nhiệm về các hoạt động kháng khuẩn của tỏi. Ức chế các enzym thiol có chứa nhất định trong các vi sinh vật bằng phản ứng nhanh chóng của thiosulfinates với nhóm thiol được giả định là các cơ chế chính cho hoạt động kháng khuẩn, và allicin có thể tự do thâm nhập vào bilayers phospholipid của thành tế bào vi khuẩn và tương tác với các enzym thiol chứa ( 32 ). Ở đây chúng ta đã sử dụng spectroscopies rung động, đặc biệt là phổ Raman, để giám sát việc chuyển qua màng của các hợp chất chứa lưu huỳnh vào tế bào vi khuẩn ( Hình. 3), Và chúng tôi thấy rằng đây là cả một sự tập trung và một sự kiện phụ thuộc thời gian. Nồng độ các hợp chất lưu huỳnh trong tế bào là tỷ lệ nghịch với sự tồn tại của tế bào và những thay đổi trong các tính năng phổ của protein vi khuẩn / enzyme dấu hiệu của sự biến tính ( 4 , 40) Có thể được liên kết với ràng buộc của các hợp chất organosulfur với protein thiol chứa. Thứ hai, chúng tôi đã chứng minh rằng việc sử dụng sự kết hợp của spectroscopies hồng ngoại và Raman cung cấp thông tin bổ sung và đáng kể biết thêm thông tin vì sử dụng một kỹ thuật đơn để theo dõi căng thẳng khuẩn và tổn thương. Một số cột mốc quan trọng (các tham số), chẳng hạn như sự thay đổi của các hợp chất lưu huỳnh, không có sẵn để được giám sát bởi một kỹ thuật (ví dụ, IR) nhưng có thể được theo dõi bởi một số khác (ví dụ, phổ Raman).

    [​IMG]
    Hình 3.

    Chuyển đổi thứ hai dẫn xuất của Raman tính năng phổ của C. jejuniđiều trị bằng 5 mM diallyl sulfua ở 4 ° C trong khoảng thời gian khác nhau thời gian (màu xanh, điều trị trong 4 giờ; đen, điều khiển). Các cột màu đỏ rải rác cho thấy sự khác biệt của quang phổ ...


    Electron kiểm tra kính hiển vi của tổn thương tế bào.
    Để tương quan dữ liệu quang phổ rung động với những thay đổi cấu trúc do các hợp chất organosulfur tỏi có nguồn gốc từ, dữ liệu hiển vi điện tử quét và dữ liệu hiển vi điện tử truyền qua được thu thập cho mẫu nontreated và điều trị bằng 5 mM diallyl sulfua trong nước luộc tiệt trùng trong 10 giờ ở 22 ° C. Hình S1 trong vật liệu bổ sung và hình. 4 cho thấy các tế bào không được điều trị của C. jejuniđã có một cấu trúc tế bào đồng nhất với màng được xác định rõ và ít mảnh vụn trong môi trường xung quanh của tế bào. Tiếp xúc với các hợp chất organosulfur dẫn đến thiệt hại về hình thái, chẳng hạn như mất tính toàn vẹn cấu trúc của vách tế bào, màng tế bào, và ma trận nội bào. Biến dạng tế bào, vỡ thành tế bào và màng, ngưng tụ vật liệu tế bào, và sự hiện diện của một lượng đáng kể các mảnh vật chất và màng tế bào chất đã được quan sát trong các tế bào bị hư hỏng của C. jejuni .

    [​IMG]
    Hình. 4.

    Truyền electron microscope hình ảnh của Campylobacter jejunikhông (a) và với (b) điều trị với các hợp chất organosulfur (diallyl sulfua) có nguồn gốc từ tỏi ( Allium sativum ).


    Cụm, phân tích dendrogram, và lớp tương tự.
    Mức chấn thương của C. jejuni đã được nghiên cứu sử dụng ba mô hình phân biệt khác nhau, bao gồm phân tích cụm (phân tích chủ yếu thành phần [PCA]), phân tích dendrogram (phân tích chức năng biệt thức [DFA]), và phân tích lớp analog (mô hình độc lập mềm của lớp tương tự [SIMCA]). Cả ba phân tích được dựa trên lựa chọn chủ yếu thành phần; PCA là chemometrics nonsupervised, trong khi DFA và SIMCA là chemometrics giám sát ( 18 ). Do các tính năng của vectơ chiều cao cho tia hồng ngoại và quang phổ Raman (số sóng so với cường độ tín hiệu), chiết xuất PC lớn là rất quan trọng để phân tích chemometric-mô hình. Hình 5 cho thấy sự phân biệt rõ ràng đại diện của C. jejunimẫu đối xử với các hợp chất organosulfur (diallyl sulfua) trong các khoảng thời gian khác nhau ở 22 ° C. Phổ từ hai thí nghiệm đầu tiên được sử dụng để thiết lập các mô hình phân biệt, và phổ từ thí nghiệm thứ ba đã được sử dụng để xác nhận mô hình. Rõ ràng phân biệt (DFA) và cụm chặt chẽ toàn diện (PCA) chỉ ra một ý nghĩa ( P khác biệt <0,05) trong mỗi nhóm mẫu, với khoảng cách khác nhau, interclass 3,15-29,86 dựa trên phép đo khoảng cách Mahalanobis tính giữa các trọng tâm của lớp học. Clusters với giá trị khoảng cách interclass cao hơn 3 được coi là khác biệt đáng kể với nhau ( 12 , 18 ). Lớp kết quả tương tự được thể hiện trong Bảng 3, Và tốc độ chỉnh ~90% cho phân loại dữ liệu đã đạt được cho cả quang phổ hồng ngoại và Raman. Hơn nữa, trong nghiên cứu hiện tại, hoặc tiệt trùng nước mặn hoặc nước dùng campylobacter được sử dụng cho phân tích của cả ba mô hình phân ở nhiệt độ điều trị khác nhau (4 hoặc 22 ° C). Ảnh hưởng của nhiệt độ hoặc vật liệu không liên quan từ một trong hai ma trận (hoặc nước dùng hoặc nước mặn) là không đáng kể. Thành phần Matrix đã được gỡ bỏ bằng cách ly tâm và lọc qua màng lọc nhôm để loại bỏ ảnh hưởng của các thành phần vào chất lượng quang phổ và độ tái lập (xem ở trên) ( 3 ).

    [​IMG]
    Hình. 5.

    (a) phân tích chủ yếu thành phần hai chiều đại diện của C. jejuni ly cocktail trong tiệt trùng vi khuẩn campylobacter nước dùng không chuyên biệt với 5 mM điều trị diallyl sulfua 0 (đối chứng), 2, 4, 8, 12, và 24 giờ ở nhiệt độ phòng (22 ° C) ...
    [​IMG]
    Bàn số 3.

    Kết quả phân loại SIMCA cho mỗi lần điều trị so với những người cho một điều khiển một


    phân tích mô hình PLSR.
    PLSR sử dụng một số sóng dưới 1.800 cm -1 là x và một biến chỉ số (bốc cốt truyện) cho sự khác biệt giữa các chủng các cấp thương như y được thực hiện cho cả spectroscopies hồng ngoại và Raman. Tất cả các thông số liên quan đến mô hình PLSR được tóm tắt trong Bảng 4 . Do số lượng hạn chế của mẫu, nghỉ-one-out phương pháp được thực hiện như một bước kiểm chứng chéo. Một mô hình PLSR tốt nên có giá trị cao cho các hệ số hồi quy ( R ) (> 0,95) và RPD (> 5) và giá trị thấp cho RMSEE và RMSECV (<1) để hiệu chuẩn và kiểm chứng chéo ( 18). Bên cạnh đó, một số lượng hợp lý của các biến tiềm ẩn (thường <10) là mong muốn cho các mô hình PLSR để tránh tiếng ồn như các ban nhạc hữu ích trong mô hình, sinh động gọi là “overfitting” ( 3 ). Cả hai mô hình PLSR phổ dựa trên FT-IR và Raman có kết quả đầy hứa hẹn cho việc dự đoán nồng độ khác nhau của sự tồn tại cho C. jejuni trong hoặc nước luộc tiệt trùng hoặc nước mặn được điều trị bằng các hợp chất organosulfur tỏi có nguồn gốc từ. Nhìn chung, các mô hình PLSR cả infrared- và Raman dựa trên cung cấp mô hình tương tự của hành vi và dự đoán khả năng trên cơ sở R , RPD, và RMSEE.

    [​IMG]
    Bảng 4.

    Một phần mô hình hồi quy bình phương nhỏ nhất để định lượng của live C. jejuni chủng được điều trị bằng organosulfur tỏi có nguồn gốc từ các hợp chất một


    Đang tải nghiên cứu âm mưu của mô hình PLSR.
    Phân tích các lô phổ tải FT-IR và Raman có nguồn gốc từ các mô hình PLSR cá nhân cho thấy, thành phần hóa học của tế bào vi khuẩn bị ảnh hưởng bởi việc điều trị của các hợp chất organosulfur ( Fig. 6 ). Các ban nhạc lớn của các thành phần chủ yếu đầu tiên (PC) là quan trọng nhất để làm sáng tỏ những thay đổi sinh lý của tế bào vi khuẩn trong điều trị khác nhau, như được xác định bởi một chiều ANOVA và t test ( P <0,05). PC đầu tiên có thể giải thích sự đóng góp xấp xỉ 76% và 81% cho các hệ số hồi quy ( R giá trị) cho các mô hình FT-IR và Raman PLSR, tương ứng. Đối với một cốt truyện FT-IR tải ( Fig. 6 a), ban nhạc đặc biệt tại 916 cm -1được gán cho khu vực phosphodiester ( 30 ), và ban nhạc khác tại 991 cm -1 cũng được gán cho phosphodiester kéo dài ( 39 ). Ban nhạc tại 1.637 cm -1 được gán cho amide I của cấu trúc tấm β nếp gấp ( 3 ). Điều này cho thấy tầm quan trọng của sự toàn vẹn của phosphodiester và cấu trúc thứ cấp protein để sống sót tế bào dưới phương pháp điều trị không thuận lợi, chẳng hạn như tiếp xúc với organosulfur hợp chất. Đối với cốt truyện tải Raman ( Fig. 6 b), khu vực ban nhạc đặc biệt xung quanh 520-540 cm -1 được gán cho S-S disulfua kéo dài trong protein ( 39 ). Ban nhạc tại 996 cm -1được gán cho C-O ribose, C-C ( 36 ). Ban nhạc tại 1.004 cm -1được gán cho phenylalanin ( 39 ). Ban nhạc tại 1.437 cm -1 được gán cho các CH 2 biến dạng của chất béo ( 36 ). Ban nhạc tại 1454 cm -1 được gán cho CH 2 kéo dài của phospholipid ( 30 ). Ban nhạc tại 1.508 cm -1 được gán cho cytosine ( 36 ), và ban nhạc tại 1634 cm -1 được gán cho amide I ( 39). Kết quả này chứng tỏ rằng âm mưu Raman tải khẳng định bản chất bổ sung của Raman và FT-IR spectroscopies để xác định loại và mức độ tổn thương tế bào vi khuẩn như được chỉ ra bởi sự thay đổi trong thành phần hóa học của tế bào điều trị không thuận lợi. Sự khác biệt giữa các tế bào tiếp xúc với phương pháp điều trị khác nhau xung quanh 520-540 cm -1 là ấn tượng và phản ánh sự hấp thu của tế bào của các hợp chất lưu huỳnh, cung cấp bằng chứng ủng hộ giả thuyết rằng cơ chế diệt khuẩn lớn đối với bất hoạt tế bào bằng tỏi là từ thiệt hại gây ra bởi các hợp chất organosulfur và là liên quan đến sự kết hợp của thiosulfinates với enzyme hoặc protein chức năng mà có nguyên tử lưu huỳnh, do đó làm thay đổi cấu trúc của những enzyme hoặc protein ( 5 , 14, 32 , 38 ).

    [​IMG]
    Hình. 6.

    Đang tải âm mưu của thành phần chủ yếu đầu tiên thu được từ PLSR cho quang phổ FT-IR (a) và phổ Raman (b) đối với C. jejuni căng thẳng.
    Tóm lại, tập trung tỏi có hiệu quả trong việc ức chế sự phát triển của C. jejuni . Sự ức chế này là tỷ lệ thuận với nồng độ của các hợp chất organosulfur, cho thấy tác dụng kháng khuẩn phụ thuộc vào số nguyên tử lưu huỳnh trong sulfide diallyl. FT-IR quang phổ xác minh rằng các hợp chất organosulfur (sulfide diallyl và thiosulfinates) đóng góp phần lớn vào hiệu quả kháng khuẩn của tỏi, nhiều hơn đáng kể so với các hợp chất phenolic. Phổ Raman tiến hành tại một thông tin cấp đơn bào được cung cấp bổ sung cho rằng cung cấp bởi quang phổ FT-IR và rõ ràng cho thấy rằng các thành phần lưu huỳnh được hấp thụ bởi C. jejuni tế bào (~520 đến 540 cm -1). Điều này hỗ trợ mạnh mẽ các kết quả của nghiên cứu trước đây cho thấy các hợp chất organosulfur có thể tự do thâm nhập màng tế bào và kết hợp với một enzyme thiol chứa và / hoặc protein, làm thay đổi cấu trúc của họ. Phân tích quang phổ dựa trên cụm, phân tích dendrogram, và phân tích lớp analog thể tách riêng C. jejuni dựa trên mức độ chấn thương khác nhau, và hiệu ứng này có thể được định lượng bằng mô hình PLSR để dự đoán sự tồn tại thực tế của C. jejunisau khi điều trị sulfide diallyl ở nồng độ khác nhau và ở nhiệt độ khác nhau. Các thành phần hóa sinh đặc biệt của màng tế bào liên quan chặt chẽ nhất để tổn thương tế bào vi khuẩn có thể được xác định từ lô bốc quang phổ dựa trên. Đây là nghiên cứu đầu tiên cho thấy cách FT-IR và Raman spectroscopies có thể được sử dụng cùng nhau để nghiên cứu căng thẳng vi khuẩn và chấn thương trong điều kiện xử lý không thuận lợi, và nó cho thấy tiềm năng của kỹ thuật này để theo dõi các vi sinh vật gây bệnh hoặc hư hỏng nhanh chóng và chính xác, có khả năng cho lĩnh vực và làm việc trực tuyến.

    Đi đến:
    VẬT LIỆU BỔ SUNG
    [Tài liệu bổ sung]
    Nhấp vào đây để xem.
    Đi đến:
    LỜI CẢM ƠN
    Chúng tôi vô cùng cảm kích sự giúp đỡ của Valerie Jean Lynch-Holm với kính hiển vi điện tử tại Franceschi Microscopy và Trung tâm Imaging tại Đại học bang Washington (WSU), Pullman, WA.

    Công trình này được hỗ trợ từ quỹ trao cho BAR thông qua một đặc biệt cấp an ninh lương thực của USDA và từ Trường Khoa học Thực phẩm tại WSU. Nghiên cứu trong phòng thí nghiệm của MEK được hỗ trợ bởi National Institutes of Health, Sở Y tế và Dịch vụ Nhân sinh, theo số hợp đồng NO1-Al-30.055 và, một phần, từ các quỹ được cung cấp bởi các trường học của phân tử Biosciences tại WSU. Chúng tôi cũng chân thành cảm ơn sự hỗ trợ của Quỹ khoa học quốc gia (giải thưởng DMR-0.619.310 ) và Đại học Ứng dụng Idaho sinh học của Công nghệ nano (BANTech) Trung tâm.

    Các mô hình chemometric trong nghiên cứu hiện nay đã được phát triển với các chương trình được viết bởi Xiaonan Lu sử dụng Matlab (phiên bản 2010a). Các độc giả quan tâm đến mã lập trình Matlab dùng để PCA, DFA, SIMCA, PLSR, và phương pháp tiền xử lý quang phổ khác nên gửi yêu cầu đến ude.usw@ul_nanoaix .

    Đi đến:
    CHÚ THÍCH
    † tài liệu bổ sung cho bài viết này có thể được tìm thấy tại http://aem.asm.org/ .

    ▿ đăng trước in trên 3 tháng 6 năm 2011.

    Đi đến:
    TÀI LIỆU THAM KHẢO
    1. Ahn J., Grun IU, Mustapha A. 2004. kháng khuẩn và các hoạt động chống oxy hóa của các chất chiết xuất tự nhiên in vitro và in thịt bò xay . J. Food Prot. 67 : 148-155 [ PubMed ]
    2. Ahn J., Grun IU, Mustapha A. 2007. Ảnh hưởng của chiết xuất thực vật đến tăng trưởng của vi sinh vật, thay đổi màu sắc, và quá trình oxy hóa lipid trong thịt bò nấu chín . Thực phẩm Microbiol. 24 : 7-14 [ PubMed ]
    3. Al-Qadiri HM, Lin M., Al-Thánh MA, Cavinato AG, Rasco BA 2008. Phát hiện chấn thương nhiệt sublethal trong Salmonella enterica serotype Typhimurium và Listeria monocytogenes sử dụng biến đổi Fourier hồng ngoại (FT-IR) quang phổ (4.000 đến 600 cm -1 ) . J. Thực phẩm Sci. 73 : M54-M61 [ PubMed ]
    4. Alvarez-Ordóñez A., Prieto M. 2010. Những thay đổi về siêu cấu và biến đổi Fourier phổ hồng ngoại của các tế bào serovar Typhimurium Salmonella enterica sau khi tiếp xúc để nhấn mạnh điều kiện . Appl.Môi trường. Microbiol. 76 : 7598-7607 [ PMC bài viết miễn phí ] [ PubMed ]
    5. Ankri S., Mirelman D. 1999. đặc tính kháng khuẩn của chất allicin từ tỏi . Vi khuẩn lây nhiễm. 2 : 125-129 [ PubMed ]
    6. Benkeblia N. 2004. hoạt động kháng khuẩn của chiết xuất tinh dầu của củ hành khác nhau (Allium cepa) và tỏi (Allium sativum) . LWT Thực phẩm Sci. Technol. 37 : 263-268
    7. Thanh toán J., Sherman PW 1998. chức năng kháng khuẩn của các loại gia vị: tại sao Some Like It Hot . Q. Rev. Biol. 73 : 3-49 [ PubMed ]
    8. Castellano P., Vignolo G., Farías RN, Arrondo JL, Chehín R. 2007. Molecular xem bằng cách biến đổi Fourier quang phổ hồng ngoại của mối quan hệ giữa lactocin 705 và màng: suy đoán về cơ chế kháng khuẩn . Appl. Môi trường. Microbiol. 73 : 415-420 [ PMC bài viết miễn phí ] [ PubMed ]
    9. Choo-Smith L.-P., et al. 2001. Điều tra vi sinh vật (vi) thuộc địa không đồng nhất bằng quang phổ rung động . Appl. Môi trường. Microbiol. 67 : 1461-1469 [ PMC bài viết miễn phí ] [ PubMed ]
    10. Chung I., Kwon SH, Shim S.-T., Kyung KH 2007. Synergistic hoạt động antiyeast dầu và allyl tỏi rượu có nguồn gốc từ alliin trong tỏi . J. Thực phẩm Sci. 72 : M437-M440 [ PubMed ]
    11. Cowan MM 1999. Sản phẩm thực vật như tác nhân kháng khuẩn . Clin. Microbiol. Rev. 12 : 564-582 [ PMC bài viết miễn phí ] [ PubMed ]
    12. Davis R., Irudayaraj J., Reuhs BL, Mauer LJ 2010. Phát hiện E. coli O157: H7 từ thịt bò xay sử dụng biến đổi Fourier hồng ngoại (FT-IR) quang phổ và chemometrics . J. Thực phẩm Sci. 75 : M340-M346 [ PubMed ]
    13. Efrima S., Zeiri LL 2008. Hiểu SERS của vi khuẩn . J. Raman Spectrosc. 40 : 277-288
    14. Feldberg RS, et al. 1988. Trong ống nghiệm cơ chế ức chế tăng trưởng tế bào vi khuẩn bằng allicin .Antimicrob. Đại lý Chemother. 32 : 1763-1768 [ PMC bài viết miễn phí ] [ PubMed ]
    15. Friedman M., Henika PR, Mandrell RE 2002. hoạt động diệt khuẩn của các loại tinh dầu thực vật và một số thành phần riêng biệt của họ chống lại Campylobacter jejuni, Escherichia coli, Listeria monocytogenes, và Salmonella enterica . J. Food Prot. 65 : 1545-1560 [ PubMed ]
    16. Friedman M., Henika PR, Mandrell RE 2003. hoạt động kháng khuẩn của benzaldehydes phenolic và axit benzoic chống Campylobacter jejuni, Escherichia coli, Listeria monocytogenes, và Salmonella enterica. J. Food Prot. 66 : 1811-1821 [ PubMed ]
    17. Ganan M., Martinez-Rodriguez AJ, Carrascosa AV 2009. hoạt động kháng khuẩn của các hợp chất phenolic rượu chống Campylobacter jejuni . Kiểm soát thực phẩm 20 : 739-742
    18. Goodacre R. 2003. Phân tích giải dữ liệu quang phổ sử dụng máy học đơn giản, quy tắc interpretable . VIB. Spectrosc. 32 : 33-45
    19. Harris JC, Cottrell SL, Plummer S., Lloyd D. 2001. đặc tính kháng khuẩn của Allium sativum (tỏi) .Appl. Microbiol. Biotechnol. 57 : 282-286 [ PubMed ]
    20. Harz M., Rosch P., Popp J. 2009. rung động phổ-một công cụ mạnh mẽ cho việc xác định nhanh chóng trên các tế bào vi khuẩn ở cấp đơn bào . Cytometry Một 75 : 104-113 [ PubMed ]
    21. Kim JW, Kim Young Saeng, Kyung KH năm 2004. Hoạt động ức chế của tinh dầu tỏi và hành tây chống lại vi khuẩn và nấm men . J. Food Prot. 67 : 499-504 [ PubMed ]
    22. Kirschner C., et al. 2001. Phân loại và xác định các enterococci: một kiểu hình so sánh, kiểu gen, và nghiên cứu quang phổ rung động . J. Clin. Microbiol. 39 : 1763-1770 [ PMC bài viết miễn phí ] [ PubMed ]
    23. Kumar M., Berwal JS 1998. Độ nhạy của tác nhân gây bệnh thực phẩm để tỏi (Allium sativum) . J. Appl. Microbiol. 84 : 213-215 [ PubMed ]
    24. Kyung KH, Lee YC 2001. hoạt động kháng khuẩn của các hợp chất lưu huỳnh có nguồn gốc từ S -alk sulfoxides (en) yl-l-cysteine trong Allium và Brassica. Thực phẩm Rev . Int. 17 : 183-198
    25. Lacombe A., Wu VC, Tyler S., Edwards K. 2010. hành động kháng khuẩn của các thành phần nam việt quất Mỹ; phenolics, anthocyanins, và axit hữu cơ, chống Escherichia coli O157: H7 . Int. J. Microbiol Thực phẩm. 139 : 102-107 [ PubMed ]
    26. Lee C.-F., Han C.-K., Tsau J.-L. 2004. Trong ống nghiệm hoạt động ức chế của chiết xuất tỏi tây Trung Quốc chống lại loài Campylobacter . Int. J. Microbiol Thực phẩm. 94 : 169-174 [ PubMed ]
    27. Lin M., et al. 2004. Phân biệt đối xử của Listeria monocytogenes còn nguyên vẹn và bị thương bởi biến đổi Fourier quang phổ hồng ngoại và phân tích thành phần chính . J. Agric. Thực phẩm Chem. 52 : 5769-5772 [ PubMed ]
    28. López-Díez EC, Winder CL, Ashton L., Currie F., Goodacre R. 2005. Giám sát chế độ hoạt động của kháng sinh sử dụng phổ Raman: điều tra ảnh hưởng subinhibitory trên amikacin trên Pseudomonas aeruginosa . Anal. Chem. 77 : 2901-2906 [ PubMed ]
    29. Maquelin K., et al. 2003. Nghiên cứu dọc của việc thực hiện spectroscopies rung động để xác định nhanh chóng của vi khuẩn và nấm thu hồi từ các nền văn hóa máu . J. Clin. Microbiol. 41 : 324-329 [ PMC bài viết miễn phí ] [ PubMed ]
    30. Maquelin K., et al. 2002. Xác định các vi sinh vật có liên quan y tế của quang phổ rung động . J. Microbiol. Phương pháp 51 : 255-271 [ PubMed ]
    31. Medina E., de Castro A., Romero C., Brenes M. 2006. So sánh nồng độ của các hợp chất phenolic trong dầu ô liu và các loại dầu thực vật khác: tương quan với hoạt tính kháng khuẩn . J. Agric. Thực phẩm Chem. 54 : 4954-4961 [ PubMed ]
    32. Miron T., Rabinkov A., Mirelman D., Wilchek M., Weiner L. 2000. Phương thức hoạt động của allicin: thấm sẵn sàng của mình thông qua màng phospholipid có thể đóng góp cho hoạt động sinh học của nó .Biochim. Biophys. Acta 1463 : 20-30 [ PubMed ]
    33. Moritz TJ, et al. 2010. Ảnh hưởng của điều trị cefazolin trên chữ ký Raman nonresonant của trạng thái trao đổi chất của các tế bào Escherichia coli cá nhân . Anal. Chem. 82 : 2703-2710 [ PubMed ]
    34. Mouwen DJ, Weijtens MJ, Capita R., Alonso-Calleja C., Prieto M. 2005. Phân biệt đối xử đồng thuận intergenic loại PCR lặp đi lặp lại enterobacterial Campylobacter coli và Campylobacter jejuni bởi biến đổi Fourier quang phổ hồng ngoại . Appl. Môi trường. Microbiol. 71 : 4318-4324 [ PMC bài viết miễn phí ] [ PubMed ]
    35. Mouwen DJ Capita R., Alonso-Calleja C., Prieto-Gómez J., Prieto M. 2006. Artificial neural network dựa xác định các loài Campylobacter bởi biến đổi Fourier quang phổ hồng ngoại . J. Microbiol. Phương pháp 67 : 131-140 [ PubMed ]
    36. Movasaghi Z., Rehman S., Rehman IU 2008. Biến đổi Fourier hồng ngoại (FTIR) quang phổ của các mô sinh học . Appl. Spectrosc. Rev. 43 : 134-179
    37. Movasaghi Z., Rehman S., Rehman IU 2007. phổ Raman của các mô sinh học . Appl. Spectrosc. Rev. 42 : 493-541
    38. Naganawa R., et al. 1996. Ức chế sự phát triển của vi sinh vật bởi ajoene, một hợp chất chứa lưu huỳnh có nguồn gốc từ tỏi . Appl. Môi trường. Microbiol. 62 : 4238-4242 [ PMC bài viết miễn phí ] [ PubMed ]
    39. Naumann D. 2001. FT-hồng ngoại và FT-Raman quang phổ trong nghiên cứu y sinh . Appl. Spectrosc. Rev. 36 : 239-298
    40. Neugebauer U., et al. 2007. Ảnh hưởng của thuốc kháng sinh fluoroquinolon vào sự tăng trưởng của vi khuẩn của S. epidermidis sử dụng các tiềm năng độc đáo của quang phổ rung động . J. Phys. Chem. Một 111 : 2898-2906 [ PubMed ]
    41. O'Gara EA, Hill DJ, Maslin DJ 2000. Hoạt động của dầu tỏi, bột tỏi, và diallyl họ thành phần chống Helicobacter pylori . Appl. Môi trường. Microbiol. 66 : 2269-2273 [ PMC bài viết miễn phí ] [ PubMed ]
    42. lật đổ A., et al. 2006. Biến đổi Fourier hồng ngoại và quang phổ Raman cho đặc điểm của các chủng vi khuẩn Listeria monocytogenes . Appl. Môi trường. Microbiol. 72 : 228-232 [ PMC bài viết miễn phí ] [ PubMed ]
    43. Công viên SF 2002. Các sinh lý của loài Campylobacter và tính phù hợp của nó với vai trò của họ như là những mầm bệnh . Int. J. Microbiol Thực phẩm. 74 : 177-188 [ PubMed ]
    44. Queiroz YS, Ishimoto EY, Bastos DH, Sampaio GR, Torres EA 2009. tỏi (Allium sativum L.) và sẵn sàng để ăn các sản phẩm tỏi: in vitro chống oxy hóa hoạt động . Thực phẩm Chem. 115 : 371-374
    45. Rees LP, Minney SF, Plummer NT, Slater JH, Skyrme DA 1993. Một đánh giá định lượng về hoạt tính chống vi khuẩn của tỏi (Allium sativum) . Thế giới J. Microbiol. Biotechnol. 9 : 303-307 [ PubMed ]
    46. Rosch P., et al. 2005. Chemotaxonomic xác định các vi khuẩn duy nhất bằng cách vi phổ Raman: ứng dụng để dọn dẹp phòng có liên quan nhiễm bẩn sinh học . Appl. Môi trường. Microbiol. 71 : 1626-1637 [ PMC bài viết miễn phí ] [ PubMed ]
    47. Rose P., Whiteman M., Moore PK, Zhu YZ 2005. Bioactive S - alk (en) chất chuyển hóa YL cysteine sulfoxide trong chi Allium: hóa học của tác nhân điều trị tiềm năng . Nat. Prod. Đại diện. 22 : 351-368 [ PubMed ]
    48. Ross ZM, O'Gara EA, Hill DJ, Sleightholme HV, Maslin DJ 2001. đặc tính kháng khuẩn của dầu tỏi chống lại vi khuẩn đường ruột của con người: đánh giá các phương pháp và so sánh với các sulfua dầu tỏi và bột tỏi . Appl. Môi trường. Microbiol. 67 : 475-480 [ PMC bài viết miễn phí ] [ PubMed ]
    49. Sivam GP 2001. Bảo vệ chống Helicobacter pylori và bệnh nhiễm khuẩn khác bằng tỏi . J. Nutr. 131 : 1106S-1108S [ PubMed ]
    50. Stöckel S., et al. 2010. Phương pháp ngừng hoạt động phổ Raman tương thích cho endospores gây bệnh . Appl. Môi trường. Microbiol. 76 : 2895-2907 [ PMC bài viết miễn phí ] [ PubMed ]
    51. Sun T., Powers JR, Tang J. 2007. Đánh giá tình hình hoạt động chống oxy hóa của măng tây, bông cải xanh và nước ép của họ . Thực phẩm Chem. 105 : 101-106
    52. Unal R., Fleming HP, McFeeters RF, Thompson RL, Breidt F., Jr., Giesbrecht FG 2001. xét nghiệm định lượng Novel để ước tính hoạt động kháng khuẩn của nước ép tỏi tươi . J. Food Prot. 64 : 189-194 [ PubMed ]
    53. Valtierra-Rodríguez D., Heredia NL, Garcia S., Sánchez E. 2010. Giảm Campylobacter jejuni và Campylobacter coli trong da gà bởi chiết xuất hoa quả . J. Food Prot. 73 : 477-482 [ PubMed ]
    54. Willemse-Erix DFM, et al. 2009. fingerprinting quang về dịch tễ học của vi khuẩn: phổ Raman như một phương pháp đánh máy theo thời gian thực . J. Clin. Microbiol. 47 : 652-659 [ PMC bài viết miễn phí ] [ PubMed ]
    55. Wu VCH, Qiu X., Bushway A., Harper L. 2008. hiệu ứng kháng khuẩn của cranberries Mỹ (Vaccinium macrocarpon) trên các mầm bệnh từ thực phẩm . LWT Thực phẩm Sci. Technol. 41 : 1834-1841
    56. Wu VCH, Qiu X., de los Reyes B., Lin C.-S., Pan YJ 2009. Áp dụng nam việt quất cô đặc (Vaccinium macrocarpon) để kiểm soát Escherichia coli O157: H7 trong thịt bò xay và cơ chế kháng khuẩn của nó liên quan đến các downregulated slp , hdeACFA . Thực phẩm Microbiol. 26 : 32-38 [ PubMed ]
    57. Wu VCH, Qiu X., Hsieh Y.-HP 2008. Đánh giá của Escherichia coli O157: H7 trong nước táo với trái cây Cornus (Cornus officinalis . Sieb et Zucc .) Trích xuất bằng phương tiện truyền thông truyền thống và phương pháp mỏng lớp agar . Thực phẩm Microbiol. 25 : 190-195 [ PubMed ]
    58. Wu VCH 2008. Một đánh giá các phương pháp chấn thương và phục hồi vi khuẩn trong thực phẩm . Thực phẩm Microbiol. 25 : 735-744 [ PubMed ]
    59. Yin M.-C., Cheng W.-S. 2003. chống oxy hóa và các hiệu ứng kháng khuẩn bốn hợp chất organosulfur tỏi có nguồn gốc từ trong thịt bò xay . Thịt Sci. 63 : 23-28 [ PubMed ]
    Các bài báo về vi sinh vật ứng dụng và môi trường được cung cấp bởi Hiệp hội vi trùng học Hoa Kỳ (ASM)
     
    Điều chỉnh lại bài đăng lúc: 21 tháng Mười 2017
  4. LuongYViet

    LuongYViet Công Dân

  5. Mộng Tiên

    Mộng Tiên Người quen Tình Nguyện Viên

    Kính chào Khách Quý BaoDaDa.RS,
    Cầu chúc Bạn Ngày An Vui.
    Tôi xin phép Lương Y tôi chi tìm kiếm cho mình và chia sẻ.
    Rất mong Bạn hiểu cho, có đề rõ là "P.V (tổng hợp)".

    Cảm ơn.
    Và trân trọng.
     
    LuongYViet likes this.

Chia sẻ, giới thiệu đến bè bạn